Rhodamin B adalah zat warna merah sintetik yang umumnya digunakan sebagai pewarna tekstil dan dilarang penggunaannya pada makanan dan minuman. Pewarna merah ini berbahaya bagi kesehatan dan jika tertelan dapat menimbulkan gejala keracunan serta dapat merusak fungsi hati bila dikonsumsi jangka panjang. Meski telah dilarang karena toksisitasnya, namun masih terdapat penyalahgunaan rhodamin B sebagai pewarna makanan seperti pada saos tomat. Tujuan penelitian ini adalah memvalidasi metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) untuk menganalisis rhodamin B dalam saos tomat. Metode analisis yang digunakan adalah KCKT dengan sistem fase balik. Metode analisis telah memenuhi syarat validasi metode sesuai International Conference of Harmonisation dengan batas deteksi dan batas kuantitasi berturut-turut adalah 1 dan 3 bpj. Berdasarkan hasil analisis kualitatif rhodamin B pada sampel saos tomat, didapatkan satu dari tiga sampel saos tomat yang tidak terdaftar di BPOM menunjukkan hasil positif yang ditandai dengan waktu retensi yang hampir sama antara sampel dan standar (5,5menit). Kadar rata-rata rhodamin B dalam sampel tersebut adalah 25µg/g saos tomat.